ПОДБОР И ОПТИМИЗАЦИЯ КОМПОНЕНТНОГО СОСТАВА ТЕСТ-СИСТЕМЫ ДЛЯ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ НОДУЛЯРНОГО ДЕРМАТИТА МЕТОДОМ ПЦР

Аннотация

Актуальным направлением ветеринарной диагностики является разработка диагностических
тест-систем для выявления возбудителей инфекций, что позволит поддерживать благоприятную
экологическую обстановку окружающей среды. Взаимодействие человеческого общества и
природы стало одной из важнейших проблем современности. На пути решения экологических
проблем учеными мира разрабатываются разные методы борьбы и профилактики инфекционных
заболеваний. Разработка отечественной тест-системы для лабораторной диагностики
нодулярного дерматита крупного рогатого скота (НД КРС) с применением современных
молекулярно-генетических методов является значимой задачей, которая позволит выявить
дезоксирибонуклеиновую кислоту (ДНК) вируса НД быстро и точно на ранних стадиях
заболевания. Целью нашего исследования является подбор и оптимизация компонентного состава
тест-системы для лабораторной диагностики нодулярного дерматита методом полимеразной
цепной реакции (ПЦР). В статье представлены результаты работ по подбору и оптимизации
компонентного состава тест-системы и отработке температурно-временного режима метода
ПЦР. В ходе эксперимента проводились работы по оптимизированию концентраций основных
компонентов реакционной смеси – праймеров, дНТФ, MgCl2, а также Taq ДНК-полимеразы. По
полученным экспериментальным данным для наработки специфического продукта нодулярного
дерматита достаточно 0,25 мкл (5 ед/мкл) Taq ДНК-полимеразы, по 1 мкл (20 пмоль) праймеров,
25 мМ MgCl2 – 2 мкл и смеси дНТФ (10 мМ) – 1 мкл в объеме 25 мкл для постановки ПЦР
с отработанным температурно-временным режимом. В результате проведенных исследований
впервые в Республике Казахстан отработаны условия постановки ПЦР, позволяющие
идентифицировать вирус нодулярного дерматита КРС. На основе полученных результатов в
ветеринарной практике республики будет создана тест-система для диагностики нодулярного
дерматита на основе ПЦР.
Ключевые слова: нодулярный дерматит, полимеразная цепная реакция, тест-система,
диагностика, окружающая среда.