Разработка дуплексной тест-системы ПЦР для дифференциальной диагностики сеториоза пшеницы

Аннотация

В настоящее время септориоз является одним из наиболее вредоносных и экономически значимых заболеваний пшеницы в мире, особенно в странах с умеренным климатом. Потери от болезни в эпифитотийные годы могут достигать 20-40 %. В Казахстане септориоз занимает одну из доминирующих положений среди грибных болезней зерновых культур. В связи с неблагоприятной обстановкой в стране по данному виду заболевания требуется быстрая диагностика фитопатогенов для своевременного реагирования и принятия необходимых мер. Для решения этих задач разработана дуплексная тест-система на основе метода полимеразной цепной реакции (ПЦР). При разработке ПЦР тест-системы для дифференциальной диагностики септориоза применены молекулярно-биологические методы, с помощью которых определены наиболее консервативные участки генов грибов Parastagonospora nodorum и Zymoseptoria tritici. По найденным участкам сконструированы видоспецифичные пары праймеров, пригодные для мультиплексной детекции целевых патогенов. Оптимизированы параметры постановки ПЦР. Разработанная тест-система проверена по параметрам специфичности и чувствительности с применением ДНК грибов Zymoseptoria tritici, Parastagonospora nodorum, Pyrenophora triticirepentis, Alternaria alternata, Alternaria infectoria, Fusarium, Ascomycota, Epicoccum. Результаты лабораторных испытаний показали, что тест-система работает специфично, и чувствительность составляет 5 пикограмм ДНК в одной реакции. Ключевые слова: Parastagonospora nodorum, Zymoseptoria tritici, ПЦР, праймеры, ДНК.