Конструирование олигонуклеотидных праймеров и зонда для выявления Toxocara canis методом ПЦР в режиме реального времени

Аннотация

Токсокароз опасное зоонозное паразитарное заболевание. Заражение происходит при попадании в организм яиц паразита Toxocara, которые могут находиться в загрязнённой почве или при контакте с инфицированными животными. Попадая в организм, личинки мигрируют к различным органам и поражает печень, лёгкие, глаза и другие ткани. Вызывает висцеральный и глазной мигрирующий личиночный синдром, нейротоксокароз и скрытый или обычный токсокароз. Toxocara canis имеет важное значение для общественного здравоохранения и экономики. Актуальность диагностики токсокароза связана с его широким распространением, зоонозным характером и проявлением тяжёлых клинических форм у человека. Целью исследования является разработка олигонуклеотидов для выявления паразита T. canis с помощью ПЦР в режиме реального времени. В работе проведена оценка эффективности трёх пар праймеров, разработанных для детекции Т. canis, в целях поиска наилучшего варианта для использования в ПЦР в режиме реального времени. Исследованные олигонуклеотиды локализованы в гене ITS2 и обеспечивают амплификацию специфических фрагментов ожидаемого размера, что подтверждает их высокую специфичность и корректность дизайна. Наиболее высокая эффективность амплификации выявлена для пары праймеров T_can F2/R2 (105 п.о.), что подтверждается интенсивностью полученной полосы. Полученные более слабые ПЦР продукты для пар T_can F1/R1 и T_can F3/R3, вероятно, связаны с особенностями их связывания с матричной ДНК или формированием вторичных структур. Праймеры T_can F2, T_can R2 и зонд T_can Probe2 демонстрируют эффективную и специфичную работу в ПЦР в режиме реального времени, обеспечивая надёжную детекцию T. canis. Предложенные олигонуклеотиды будут рекомендованы для разработки диагностических тест-систем на основе ПЦР в режиме реального времени. Это важно для раннего предупреждения распространения паразитов, таким образом снижает риск осложнений и повышает эпидемиологическую безопасность.