ПОДБОР И ОПТИМИЗАЦИЯ КОМПОНЕНТНОГО СОСТАВА ТЕСТ-СИСТЕМЫ ДЛЯ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ НОДУЛЯРНОГО ДЕРМАТИТА МЕТОДОМ ПЦР (Eurasian Journal of Ecology, 2020)
Актуальным направлением ветеринарной диагностики является разработка диагностическихтест-систем для выявления возбудителей инфекций, что позволит поддерживать благоприятнуюэкологическую обстановку окружающей среды. Взаимодействие человеческого общества иприроды стало одной из важнейших проблем современности. На пути решения экологическихпроблем учеными мира разрабатываются разные методы борьбы и профилактики инфекционныхзаболеваний. Разработка отечественной тест-системы для лабораторной диагностикинодулярного дерматита крупного рогатого скота (НД КРС) с применением современныхмолекулярно-генетических методов является значимой задачей, которая позволит выявитьдезоксирибонуклеиновую кислоту (ДНК) вируса НД быстро и точно на ранних стадияхзаболевания. Целью нашего исследования является подбор и оптимизация компонентного составатест-системы для лабораторной диагностики нодулярного дерматита методом полимеразнойцепной реакции (ПЦР). В статье представлены результаты работ по подбору и оптимизациикомпонентного состава тест-системы и отработке температурно-временного режима методаПЦР. В ходе эксперимента проводились работы по оптимизированию концентраций основныхкомпонентов реакционной смеси – праймеров, дНТФ, MgCl2, а также Taq ДНК-полимеразы. Пополученным экспериментальным данным для наработки специфического продукта нодулярногодерматита достаточно 0,25 мкл (5 ед/мкл) Taq ДНК-полимеразы, по 1 мкл (20 пмоль) праймеров,25 мМ MgCl2 – 2 мкл и смеси дНТФ (10 мМ) – 1 мкл в объеме 25 мкл для постановки ПЦРс отработанным температурно-временным режимом. В результате проведенных исследованийвпервые в Республике Казахстан отработаны условия постановки ПЦР, позволяющиеидентифицировать вирус нодулярного дерматита КРС. На основе полученных результатов вветеринарной практике республики будет создана тест-система для диагностики нодулярногодерматита на основе ПЦР.Ключевые слова: нодулярный дерматит, полимеразная цепная реакция, тест-система,диагностика, окружающая среда.